Anza限制性内切酶克隆系统

演绎酶切华丽乐章
Anza限制性内切酶克隆完整系统由以下部分组成：

128种限制性内切酶
5种DNA修饰酶

1. 4 DNA 连接酶预混液
2.热敏碱性磷酸酶
3.T4多聚核苷酸激酶试剂盒
4.DNA平端化试剂盒
5.DNA末端修复试剂盒

所有的Anza限制性内切酶可以同时进行酶切，并且只需一种统一Anza缓冲液便能充分发挥出全部功能。

简单易用的Anza限制性内切酶

Anza限制性内切酶只需简易的两步方案即可使用，不管内切酶有几种，不管所使用的是哪种DNA类型——只需配置反应混合液，然后在37°C孵化15分钟。

简单的酶切方案

1.按照表1所示依序添加试剂来配置反应混合液。

2.在37°C孵化15分钟。

表1：

体积可按比例放大至5倍。

方便的缓冲液

所有Anza限制性内切酶均提供Anza™ 10X缓冲液和Anza™ 10X红色缓冲液，可以根据您的实验需求灵活选择。红色缓冲液包括一种密度试剂，其含有红色或黄色示踪染料，在1%琼脂糖凝胶上两种染料分别与800 bp DNA片段和10 bp DNA片段一同迁移。这省去了凝胶上样前繁琐的染料添加步骤，且与下游的各种实验应用兼容。*

*对于需要通过荧光激发来分析的实验应用，我们推荐使用Anza 10X缓冲液，因为Anza 10X 红色缓冲液中的黄色染料可能会影响一些荧光的检测。

产品特性

1.完全酶切

Anza™限制性内切酶仅需15分钟即可酶切完全，且一个统一酶切方案适用于所有DNA类型。

在15分钟内完成质粒DNA和PCR产物的酶切

卓越的性能

图1. Anza限制性内切酶在15分钟内完成酶切反应。 使用Anza 11 EcoRI、Anza 12 XbaI和Anza 1 NotI对质粒DNA(6,215 bp)和纯化的PCR产物(1.6 kb)进行酶切。按照推荐的方案配置反应混合液，在20µL最终体积内含有1 µg DNA和1 µL的限制性内切酶。在37°C孵化15分钟。

L - 1 Kb Plus DNA Ladder
C1 – 未酶切的质粒DNA
1 – Anza™ 11 EcoRI
2 – Anza™ 12 XbaI
3 – Anza™ 1 NotI
C2 – 未酶切的PCR片段
4 – Anza™ 11 EcoRI
5 – Anza™ 12 XbaI
6 – Anza™ 1 NotI

质粒DNA预期酶切DNA片段：
Anza 11 EcoRI, Anza 12 XbaI, Anza 1 NotI - 6,215 bp
纯化后的PCR产物预期酶切DNA 片段：
Anza 11 EcoRI - 1,133 & 506 bp
Anza 12 XbaI - 1,077 & 562 bp
Anza 1 NotI - 1,258 & 381 bp

质粒DNA的酶切

图2. Anza限制性内切酶在15分钟内完成酶切反应。 使用Anza 3 BcuI和 Anza 47 Eco521对质粒DNA(6,215bp)进行酶切，同时使用竞争对手N 的SpeI-HF（BcuI的同裂酶）和EagI-HF（Eco52I的同裂酶）。按照推荐的实验方案，反应混合物包括1 µg DNA 和1 µL Anza限制内切酶，总反应体积为20µL。按照竞争对手N推荐的实验方案，反应混合物包括1 µg DNA 和1 µL竞争对手N的限制性内切酶，总体积50 µL。按照推荐的实验方案，Anza限制性内切酶和竞争对手N 的EagI –HF都在37°C条件下孵化15分钟。按照竞争对手N的推荐方案， SpeI-HF在37°C条件下孵化5分钟。

L - 1 Kb Plus DNA Ladder
C – 未酶切的质粒DNA
1 – Anza™ 3 BcuI
2 – SpeI-HF (Competitor N)
3 – Anza™ 47 Eco52I
4 – EagI-HF (Competitor N)

PCR产物的酶切

图3. Anza限制性内切酶在15分钟内完成酶切反应。 使用Anza 3 BcuI、Anza 9 NdeI和Anza 47 Eco521对纯化的PCR产物(6,215bp)进行酶切，同时使用竞争对手N的SpeI-HF（BcuI的同裂酶）、NdeI和EagI-HF（Eco52I的同裂酶）。按照推荐的实验方案，反应混合物包括1 µg DNA 和1 µLAnza™限制内切酶，总反应体积20µL。按照竞争对手N推荐的实验方案，反应混合物包括1 µg DNA 和1 µL 竞争对手N的限制性内切酶，总体积50 µL。37°C条件下孵化15分钟。

L - 1 Kb Plus DNA Ladder
C – 未酶切的DNA
1 – Anza 3 BcuI
2 – SpeI-HF (Competitor N)
3 – Anza 9 NdeI
4 – NdeI (Competitor N)
5 – Anza 47 Eco52I
6 – EagI-HF (Competitor N)

预期的DNA片段
Anza 3 BcuI - 938, 346, 322, & 33 bp
Anza 9 NdeI - 1,486 & 153 bp
Anza 47 Eco52I - 899, 381, 197, & 162 bp

2.无星号活性

一些限制性内切酶可能出现星号活性，或者表现出限制酶与DNA识别位点的识别特异性降低。当反应条件不是最佳，如甘油浓度过高或Mg2+存在时，可能出现星号活性，其可导致DNA的非特异性剪切。Anza限制性内切酶经优化具有灵活的酶切时间-从15分钟到过夜酶切均可进行完全酶切-无需担心星号活性。

将质粒DNA和PCR产物酶切16小时

图4.使用 Anza限制性内切酶即使过夜酶切后也无星号活性。 使用Anza 11 EcoRI、Anza 12 XbaI和Anza 1 NotI对质粒DNA (6,215 bp)和纯化的PCR产物(1.6 kb)进行酶切。反应混合物中包括1 酶切。反应混和1 酶切限制性内切酶，总体积为20 μL，按照推荐的实验方案进行酶切。在37照推孵育16小时。

L - 1 Kb Plus DNA Ladder
C1 – 未酶切质粒 DNA
1 – Anza™ 11 EcoRI
2 – Anza™ 12 XbaI
3 – Anza™ 1 NotI
C2 – 未酶切PCR片段
4 – Anza™ 11 EcoRI
5 – Anza™ 12 XbaI
6 – Anza™ 1 NotI

质粒DNA预期酶切片段

纯化的PCR产物预期酶切片段

3.多重酶切使用一种统一缓冲液

使用Anza统一缓冲液，Anza限制性内切酶可在同一反应中进行完全的多重酶切。无需再费力查找与您所使用的酶兼容的缓冲液，同时只需一种酶切实验方案即可完成所有酶切反应，从而节省了时间。

双酶切

图5. 使用 Anza限制性内切酶在统一缓冲液中进行完全的酶切反应。 使用Anza 47 Eco52I和 Anza 14 SalI对质粒DNA(6,215bp)进行酶切，同时使用竞争对手N 的EagI-HF（Eco52I的同裂酶）和SalI-HF。按照推荐的实验方案，反应混合物包括1 µg DNA 和1 µL 每种Anza限制内切酶，总反应体积为20µL。按照竞争对手N推荐的实验方案，反应混合物包括1 µg DNA 和每种1 µL竞争对手N的限制性内切酶，总体积50 µL。在37°C条件下孵化15分钟。

L - 1 Kb Plus DNA Ladder
C – 未酶切质粒 DNA
1 – Anza™ 47 Eco52I
2 – Anza™ 14 SalI
3 – Anza™ 47 Eco52I + Anza™ 14 SalI
4 – EagI-HF (Competitor N)
5 – SalI-HF (Competitor N)
6 – EagI-HF + SalI-HF (Competitor N)

预期酶切DNA片段

三重酶切

图6. Anza限制性内切酶可在统一缓冲液中实现三种酶的完全酶切。 使用Anza 1 NotI、Anza 16 HindIII和Anza 15 XmaJI对质粒DNA (6215 bp)进行酶切。单酶切反应的反应混合物包括1 酶切。单酶切和1 酶切限制性内切酶，总体积为20 内切。三重酶切反应混合物中包括1 重酶切反应混和各种限制性内切酶各1 种限，总体积为30 积为，按照推荐的实验方案进行酶切。37照推孵育15分钟。

C – 未酶切质粒 DNA
1 – Anza™ 1 NotI
2 – Anza™ 16 HindIII
3 – Anza™ 15 XmaJI
4 – Anza™ 1 NotI + Anza™ 16 HindIII + Anza™ 15 XmaJI
L - 1 Kb Plus DNA Ladder

预期DNA酶切片段

演绎酶切华丽乐章 Anza限制性内切酶克隆完整系统由以下部分组成：

128种限制性内切酶 5种DNA修饰酶

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5种DNA修饰酶