三维(3D)培养物、球状体和类器官作为癌症生物学研究的模型越来越受欢迎。与传统细胞培养相比,这些3D模型提高了科学家研究治疗效果的能力。这些3D培养物可能有几百微米厚,如何对如此厚的样本深处的细胞内的生物标记物成像,成为了一大难题。
Douglas Richardson博士是一家全球公认的生物成像中心的主任。他使用来自诱导多能干细胞(iPSCs)的皮质神经器官作为成像和显微研究样本。这些类球体直径约为600微米,是细胞宽度(平均8微米)的75倍。图像(右上图)显示了Sir-Hoechst™染色剂识别的这些皮层神经器官,此过程使用Zeiss™LSM 880共焦显微镜上的25xLD-LCI油浸物镜成像。
说到真正的3D分析-目前可以横向和轴向捕捉深层组织内的清晰图像。Invitrogen™ ProLong™Glass抗淬灭封固剂可让科学家以比任何其他商用硬质封固剂更高的深度捕获3D培养物的清晰图像。
ProLong Glass抗淬灭封固剂是一种即用型硬质封片剂,在固化后具有1.52的玻璃匹配折射率。该产品可将油浸式显微镜镜头与3D培养物之间的折射率不匹配降至最低。
优势包括:
• 焦点深度提高逾3倍
• 高达75%的轴向分辨率
• 卓越的横向分辨率
它还为有机荧光团和荧光蛋白提供出色的信噪比和光漂白保护。这使其非常适合制作清晰,明亮,高品质的3D图像。
在评估细胞健康、遗传毒性和抗癌药物的效力时,细胞增殖分析是重要的一环。但增殖很少单独进行分析;增殖分析通常与其他细胞功能检测探针联用以提供细胞状态的更多信息。为了保留对这些细胞功能探针的检测,Invitrogen™ ClickiT™ Plus EdU细胞增殖检测不仅提供了更高的性能和更简便的工作流程,而且与更多的荧光探针兼容 - 包括GFP,RFP和藻胆蛋白-可以让您进行多重检测,提供细胞状态更丰富的信息。
具有讽刺意味的是,细胞死亡机制对于多细胞生物的存活至关重要。细胞凋亡或程序性细胞死亡通过消除不需要的细胞和组织,同时破坏病毒感染或DNA损伤的细胞来降低致病威胁,对于生物体的正常生长和发育是必不可少的。
这种程序性细胞死亡功能的失活是癌症发展的核心。Invitrogen™ CellEvent™ Caspase-3/7Green检测试剂是一种新型荧光底物,可用于检测活化的caspase-3和-7,从而使您可以更轻松地利用上述试剂研究癌症的关键过程。该试剂与高内涵成像兼容,可与其他探针联用研究细胞凋亡和细胞生理,从而在其他关键细胞功能的背景下研究细胞死亡。
更丰富地鉴定增殖。在这张人类恶性黑色素瘤的图像中,您不仅可以区分增殖细胞(粉红色细胞核)和非增殖细胞(蓝色细胞核),还可识别正在开始增殖的细胞(蓝色细胞核含有一些粉红色)和活跃分裂的细胞(蓝绿色细胞核与橙色纺锤)。
将细胞凋亡复合成像以获得完整图像。首先用CellEvent Caspase-3/7 Green检测试剂(绿色)染色依托泊苷诱导细胞凋亡的U2OS人骨肉瘤细胞以检测细胞凋亡,然后用Invitrogen™ MitoTracker™Deep Red FM染料(粉红色)标记线粒体。固定和透化后,用Invitrogen™ Alexa Fluor™ 546鬼笔环肽(橙色)标记肌动蛋白。