SuperScript IV VILO预混液（SSIV VILO）包含了SuperScript IV RT，其配方经专门优化，能够为进行RT-qPCR应用的研究者同时提供便利性和高效酶的性能优势。作为一款性能卓越的逆转录酶，SuperScript IV 逆转录酶的持续合成能力相比市面上其他类型的RT酶实现了显著提升，从而能提供对低丰度靶标更高的灵敏性，对RT反应抑制剂更高的耐受性以及更快的反应时间。本预混液的配方中还包含了专利的辅助蛋白，能够在优化的缓冲环境中进一步提升RT酶与RNA模板之间的反应效果，因此SSIV VILO拥有比SuperScript VILO或其他cDNA合成试剂盒更高的效率。  

在使用较低量的RNA起始样本进行14条靶标转录本的RT-qPCR分析时，SSIV VILO实现了高于其他参加测试的市售cDNA合成试剂盒的最高反应效率（图1）。在10分钟的反应条件下，SSIV VILO的C_t 值稳定低2个循环以上。

图1.SSIV VILO与其他10款市售第一链cDNA合成预混液之间的RT-qPCR反应效率比较。根据生产商提供的使用说明，使用预混液和1 ng起始总HeLa RNA，在20 μL RT反应中合成cDNA。。对于qPCR应用而言，用户需在10 μL InvitrogenTM EXPRESS qPCR超混液（货号11785200）的反应体系中使用1 μL的RT，与Applied BiosystemsTM TaqManTM 引物和/或探针（靶向特定的基因靶标）进行反应。所显示的qPCR结果相对SSIV VILO组的倍数改变进行了归一化计算 [=1/(2^(Ct SSIV VILO – Ct 比较组))]。

近年来的调查和定性反馈结果表明，研究人员对当前的cDNA合成结果并不满意，同时他们也不得不检测越来越多的困难样本，如含有抑制剂的纯化不佳RNA，或已降解的RNA。为了解困难样本反转录的效能问题，我们在多种抑制剂存在的条件下，将SSIV VILO与其他市售的cDNA合成试剂盒进行了RT效率的比较。按照以下公式，以SSIV VILO反应的C_t 值对其他供应商的试剂盒所生成的C_t 值进行归一化计算：归一化的Y值 = [1/2^(C_{t SSIV VILO} -C_{t 供应商 x})]。如图3A所示，无论是否存在抑制剂，SSIV VILO在所有cDNA合成试剂盒中都表现出最高的反应效率。与此类似，SSIV VILO还在冷冻样本（图3B）和FFPE样本（图3C）的cDNA合成反应中实现了更高的效能。

图3A.SSIV VILO与其他8款市售预混液之间的比较。使用100 ng Hela总RNA，在20 μL RT反应体系（加入或不加指定浓度的抑制剂）中进行RT反应。在10 μL qPCR反应体系中，使用EXPRESS qPCR SuperMix和B2M基因靶点的TaqMan引物/探针评估qPCR的反应效能。

图3B.在20 μL RT反应体系中，使用50 ng冷冻组织的RNA样本进行RT反应，并对SSIV VILO与其他5款市售的预混液产品的反应效果进行比较。在10 μL qPCR反应体系中，使用EXPRESS qPCR SuperMix和基因靶向TaqMan引物/探针评估qPCR的反应性能。

图3C.在20 μL RT反应体系中使用50 ng FFPE的RNA样本进行RT反应，并对SSIV VILO与其他4款市售的预混液产品进行比较。使用EXPRESS qPCR SuperMix，以10 μL反应体系和基因靶点针对性的TaqMan引物/探针评估qPCR的反应性能。

无论您在实时荧光定量PCR反应中使用何种化学检测手段，SSIV VILO都能帮您获得最灵敏的qPCR反应效能。使用基于SYBR^TM Green染料的实时PCR检测法，SSIV VILO的灵敏度在其他市售试剂盒的平均4倍以上（图4A）。类似的灵敏度也可在基于TaqMan探针的实时PCR检测中获得（图4b）。这里展示了SSIV VILO及其他两家供应商产品的 ΔC_ts 值（C_t 供应商），这些数值均使用SS VILO组的结果值进行归一化计算。在96个靶标中的92个（96%）上，SSIV VILO都获得了比同类产品更低的Ct值；在96个靶标中的81个（84%）上，SSIV VILO都获得了比SS VILO更低的C_t 值。这里的数据图显示了，在许多靶点上，SSIV VILO都要比包括SS VILO在内的其他供应商所提供的产品低2个C_ts。

图4A.使用100 ng总Hela RNA样本和20 μL的RT反应体系，在SYBR RT-qPCR基因panel分析中比较SSIV VILO和其他3种市售的预混液（包括SS VILO）。在10 μL qPCR反应体系中， 使用EXPRESS qPCR SuperMix和基因靶点针对性的SYBR引物/探针评估qPCR的反应性能。